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影響高效梯度液相色譜儀梯度洗脫的因素有哪些

 更新時間:2022-08-23 點(diǎn)擊量:1272
  高效液相色譜儀在進(jìn)行多成分的復(fù)雜樣品分離時,經(jīng)常會碰到前面的一些成分分離不*,后面的一些成分分離度太大,且出峰很晚和峰形較差。為了使保留值相差很大的多種成分在合理的時間內(nèi)全部洗脫并相互分離,往往要用到梯度洗脫技術(shù)。
  在高效液相色譜儀中流速(壓力)梯度洗脫和溫度梯度洗脫效果不大,而且會帶來一些不利影響,因此,高效液相色譜儀中的梯度洗脫通常指流動相梯度洗脫,即在分離過程中改變流動相的組成或濃度。
  高效液相色譜儀梯度洗脫系統(tǒng)也稱為梯度洗脫或程序洗脫。在相同的分析周期中,流動相的濃度比按一定的步驟不斷變化,稱為梯度洗脫。原理:流動相由幾種不同極性的溶劑組成。通過改變流動相中溶劑的比例和改變流動相的極性,每個組分都有一個合適的容量系數(shù)k,樣品中的所有組分都能在最短的時間內(nèi)達(dá)到最佳的分離特性:提高柱效率和提高分離效率。檢測靈敏度。敏感。當(dāng)樣品中某一峰的k‘值比上一峰高出幾十至數(shù)百倍時,梯度洗脫效果特別好。在梯度洗脫過程中,必須采用恒流泵來保證流速的穩(wěn)定性,否則很難得到重復(fù)的結(jié)果。
  高效梯度液相色譜儀進(jìn)行梯度洗脫時,選定溶劑A、B之后,設(shè)定梯度速度和梯度時間,確定梯度曲線形狀,要以經(jīng)濟(jì)的梯度洗脫程序,實(shí)現(xiàn)樣品的最佳化分離。影響梯度洗脫的因素有:
  1、溶劑的純度要高,否則會使梯度洗脫的重現(xiàn)性變壞。
  2、梯度混合的溶劑互溶性要好,應(yīng)防止不互溶的溶劑進(jìn)入色譜柱。
  3、注意溶劑的粘度和密度對混合流動相組成的影響。
  4、梯度洗脫應(yīng)使用對流動相組成變化不敏感的選擇型檢測器,而不能使用對流動相組成變化敏感的通用型檢測器。

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